植物的组织培养活动的开展 

植物组织培养是20世纪初发展起来的，在当前生产实践中有着广泛应用的一项现代生物技术。该技术是指在无菌操作的条件下，借用专门配置的培养基，离体培养植物的器官、组织或细胞。普通高中《生物课程标准》对本内容的具体标准是：尝试植物的组织培养。活动建议是：用组织培养法培养花卉等幼苗，并进行露地栽培。

一、         活动分析

尝试植物组织培养是技能性目标中的模仿水平，即要求学生在教师的指导下，阅读和借鉴相关实验方案，模仿实验并动手实践。

植物组织培养主要有三个过程：愈伤组织的培养、愈伤组织的继代培养、试管苗的培养。因为实验周期较长，而且三过程有一定的相似性和连贯性，所以活动重点集中于第一环的愈伤组织的培养。同时活动的技术难度也是集中于此，涉及的技术是：无菌技术，外植体消毒和接种。出于对难度和器材配备要求考虑，初次开展这项活动最适宜的素材是胡萝卜。（外植体的体积较大耐受性高，表面消毒效果好，消毒后可再细分成容易培养的小体积，这点其他花卉植物较难做到；外植体的诱导对激素和外界条件的依赖度较小）

 二、         活动组织

活动组织可以采取课内和课外相结合的方式进行，在课内主要完成关键步骤的操作如外植体的消毒和接种的规范操作，课外时间做观察，记录培养过程。也可以采用活动小组和课内分析结合的方式进行。小组根据老师的指导制定实验计划，在老师指导下完成实验各步骤，然后在课内集中分析实验过程的问题，整体认识。

 三、         实验关键

无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键。其中包括

1 外植体的表面消毒

2 环境的灭菌  把接种的所有用具表面喷洒75%酒精，并用紫外灯照射20min。   

3 培养基和使用器具的灭菌  使用前将培养基和器具放入高压灭菌锅，121℃ 保持20min，以达到灭菌目的。注意：接种时应防止交叉污染的发生，通常在无菌滤纸上切取材料。更换材料后就必须更换滤纸。解剖刀和镊子等工具每次使用前都应放入70%酒精中浸泡，然后在火焰上反复灼烧，放凉。若将用过且已污染的滤纸继续使用，或已用过的工具未及时消毒而继续使用，极易产生一连串交叉污染。

植物组织培养重要的另一方面是植物激素的选用和比例。实验前应多查阅资料确定选用的激素和用量，不同植物所需的激素种类和水平不一样。（胡萝卜愈伤组织培养需用的激素2-4D3mg/L，KT1mg/L）

四、         实验改良

考虑培养基在南方室温配制、分装过程水分的蒸发，如果采用琼脂粉配制培养基，所需用量可减少为6-7g。10g用量制作的培养基就会稍硬，凝胶内的孔径较小，不利于外植体愈伤组织的生长。

考虑学生基本是初次进行这项活动，消毒各环节操作不熟悉，外植体的污染会交叉于接种过程和瓶内培养过程，影响整个实验的成功，外植体消毒常用的次氯酸钠（2%）可根据耐受性稍提高（5%）。宁愿部分外植体死掉，也不要整个实验因为消毒不彻底而失败。

五、         注意事项

首次培养愈伤组织时要注意避光培养（有书本介绍为暗培养）因为在无光条件下愈伤组织长得更快。而且不少植物对光敏感，如胡萝卜，在有光条件下，较难诱导出愈伤组织。

要想培育出一株完整的试管苗，必须先进行生芽培养，然后进行生根培养。如果顺序颠倒，先诱导生根就不好诱导生芽。

六、         实验技巧

1．  选用合适的组培瓶  锥形瓶封口操作很依赖操作者的熟练程度，一旦微生物进入会造成污染，导致培养失败，之前的所有工作就白费。组培瓶能有效避免此种情况。

2．  外植体宜选取初生娇嫩的植物部分   在植物生长过程中，经常会受到病毒、细菌和真菌等病原体感染，而且侵入植物体内的病毒可以通过维管束和细胞壁间连丝扩散到所有组织器官。植物初生部分分生组织处于分化阶段，其组织内的维管束还未形成，此时植物体内的病毒只能通过胞间连丝移动到分生区，一般不会受到病毒侵染。

3．  制作培养基母液  组织培养培养基含有20多种营养成分，为了避免每次配制时都要称量各成分，先将各种成分按比例配制成浓缩液，然后按量取用。母液应放在冰箱中保存。